三种不同冷冻保护剂对小鼠附睾冷冻效果的比较

目的探讨三种不同冷冻保护剂对C57BL/6J小鼠附睾冷冻的效果。方法性成熟并交配过的6~8周龄C57BL/6J雄鼠附睾,分别用3种不同冷冻保护剂二甲基亚砜(DMSO)、丙二醇(PROH)、R18S3进行玻璃化冷冻、复苏和精子采集,观察比较三个实验组的复苏精子形态、存活率以及生殖能力。结果三组冷冻复苏分离后的精子形态完整,具有镰刀头状结构;荧光染色后PROH组精子存活率为(88.17±3.43)%,明显高于DMSO组:(61.17±10.65)%和R18S3组(16.83±6.49)%(P0.05);经辅助体外受精后均具有受精能力。获得的胚胎移植后可得到正常子代小鼠(DMSO∶PROH∶R18S3=13∶8∶17)。结论 3种冷冻保护剂均适用于C57BL/6J小鼠附睾冷冻,但PROH冷冻效果较好。     

香菇中镉含量的检测与分析

为了解影响香菇镉富集的一些因素,对不同品种、不同地区、不同潮次的香菇以及香菇不同形态部分中的镉含量进行了比较研究。结果表明：不同品种香菇、不同地区以及不同潮次香菇中的镉含量具有一定的差异;此外,香菇的不同形态部分中镉的含量也不一样,其镉含量从高到低的顺序为：菌褶＞菌盖＞菌柄。     

志贺毒素2型噬菌体ΦMin27的stx2基因突变株构建及其感染特性

[目的]通过构建一株stx2基因突变的志贺毒素2型噬菌体,来观察它对不同血清型大肠杆菌的感染特性.[方法]利用九噬菌体的Red重组系统,将氯霉素抗性基因(cat)插入到大肠杆菌O157:H7 Min27株的stx2基因中,获得O157:H7 Min27的突变菌株Min27(Astx::cat).用丝裂霉素对该突变菌株进行诱导,结合抗性标记和PCR方法筛选出一株突变的志贺毒素2型噬菌体,命名为ΦMin27(△stx::cat).采用双层琼脂平板法和氯霉素抗性筛选的方法,观察ΦMin27(△stx::cat)感染21株不同血清型大肠杆菌后的裂解和溶原转换情况.[结果]2株血清型分别为O 60和O 138的大肠杆菌可以被ΦMin27(△stx::cat)溶原感染,表现出对氯霉素的抗性,但没有形成噬菌斑,而大肠杆菌MG1655株既可以被溶原又可以被裂解.溶原的菌株经丝裂霉素诱导后,能释放出感染性的ΦMin27(△stx::cat)颗粒,并对大肠杆菌MC1061进行裂解形成噬菌斑.[结论]ΦMin27(△stx::cat)可以感染和溶原特定的大肠杆菌,且溶原菌株能释放出原感染性的噬菌体,显示出ΦMin27噬菌体具有携带外源基因在若干不同血清型的大肠杆菌间水平转移的能力,为进一步研究Stx噬菌体的感染机理和志贺毒素表达调控奠定了基础.     

农杆菌介导番茄铁载体蛋白基因(LeIRT2)转化烟草的研究

构建了含有目的基因(LeIRT2)的双元载体pYF840,并成功地将植物性内含子构建到筛选标记基因新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)和gus报告基因中。利用农杆菌介导法,将铁载体蛋白(LeIRT2)基因导入革新一号烟草,PCR、PCR-Southern blotting及Southern blottlng检测结果显示,有3个烟草株系的基因组中整合了完整的铁载体基因(LeIRT2)。水培试验结果显示转基因株系1、3不但提高了植株的铁吸收能力,而且还促进了植株的生长,但转基因株系2却与对照无明显区别。     

樟个木虱形态特征及生物学特性

樟个木虱Triozacamphorae是近年来上海地区香樟上发生的一种新害虫。作者对其形态和生物学特性进行了研究。樟个木虱在上海以 1年发生 2代为主 ,偶发 3代。樟个木虱以低龄若虫在叶片上越冬 ,3月下旬至 4月上旬越冬代羽化 ;第 1代开始于 3月下旬 ,羽化高峰在 6月份 ;第 2代开始于 5月下旬 ,并主要以该代若虫越冬 ;第 3代若虫偶发 ,开始于 7月上旬 ,以若虫越冬。樟个木虱第 1代若虫的平均发育历期为 5 0 72d,1～ 5龄若虫的历期分别为 :1 8 .3 1± 2 .2 1d ,1 4. 90± 9. 92d,6 .1 1± 2 . 2 0d,5 .80±3 . 61d ,5 60± 1 5 1d。成虫的寿命为 3～ 1 1d ,平均寿命为 6 41d。樟个木虱的产卵量为 3 9. 1粒 雌虫。2 4℃下 ,卵历期 5～ 7d不等 ,平均为 5. 3 4± 0 . 5 7d ,卵平均孵化率为 83 . 7%。樟个木虱低龄若虫中 3龄若虫最耐高温 ,其次为 2龄若虫 ,1龄若虫最不耐高温。     

应用生物技术保存地方猪种种质资源研究

我国地方猪种资源十分丰富,拥有许多突出特性的品种,受到国内外养猪业者的重视。由于种种原因,有些猪种濒临绝种。生物技术的发展给地方猪种种质资源长期保存带来了希望。结合课题组近年来来的相关工作,概述了我国地方猪种资源概况及保种的迫切性,冷冻保种研究现状及地方猪种种质资源长期保存的主要技术,包括猪种配子和胚胎冷冻技术、基因组DNA库、猪体细胞克隆技术及其在长期保存种的作用。     

油菜AP2/ERF-B4类转录因子克隆及表达载体的构建

利用油菜UniGene数据库,以拟南芥转录因子保守序列为探针,通过电子克隆方法分离得到一个UniGene库Bna.17538,进一步序列拼接得到一个油菜AP2/ERF-B4亚族的转录因子BnaERFB4-1,长度为672 bp,并进行了相关的生物信息学分析.结果显示BnaERFB4-1是亲水性蛋白,蛋白质三级结构与拟南芥RAP2.6L非常相似,蛋白质无序化程度大于拟南芥RAP2.6L.设计引物通过PCR和RT-PCR方法分别从甘蓝型油菜沪油15幼苗的DNA和cDNA中分离了BnaERFB4-1基因,命名为BnaERFB4-1-Hy15.序列测定和分析显示,来源于沪油15的BnaERFB4-1-Hy15基因与电子克隆的基因序列差异很小,有3个氨基酸位点不同,存在一个内含子.将BnaERFB4-1-Hy15基因通过BamHⅠ和SacⅠ酶切后分别插入酵母表达载体YK3302和植物双元表达载体pYF1404的相应位置,构建了BnaERFB4-1-Hy15基因的酵母体内结合和植物转化载体,为深入研究该基因在油菜抗逆调控中的作用奠定了基础.     

微生物多糖WL-26深层发酵工艺的优化

产碱杆菌Alcaligenes sp.JL-1能分泌一种高分子多糖WL-26.以生物量、发酵产量和黏度为主要指标,对其深层发酵培养基进行了筛选,并在此基础上对发酵条件进行优化.培养条件确定为:40g/L蔗糖,4g/L复合氮源(20%硝酸钠和80%的牛肉膏),2g/L KH2PO4,0.1g/L MgSO4,0.5mL/L FeSO4.初始pH为7.2～7.4,5%的接种量、装液量为50mL/250mL三角瓶、转速为200r/min、30℃恒温培养58h,WL-26产量从9.326g/L提高到21.767g/L.     

大肠杆菌VT2噬菌体的分离与溶源转染

本试验利用指示菌MC1061。经双层琼脂法纯化和PCR扩增vt2基因,分别从大肠杆菌0157菌株、牛粪、鸡粪和污水中分离获得5株含vt2基因的噬菌体。这些噬菌斑透明,直径为0．5-2min,对指示菌的感染效价均在10^9PFU／mL以上,抵抗氯仿和56℃30min的作用。将噬菌体分离株SHφWl感染MC1061后。经PCR鉴定获得一株溶源菌株(MC1061／SHφW1)。溶源株的LB培养滤液对Vero细胞产生了显著的病变效应,而MC1061在同等条件下培养的滤液无细胞病变,表明VT2噬菌体通过溶源将vt2毒力基因水平转移,证实了VT2噬菌体的转染与细菌毒力相关。     

猪圆环病毒研究进展

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)为无囊膜的单股环状负链DNA病毒,病毒粒子直径约17～20nm,是迄今已知最小的动物病毒之一。PCV属圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属成员。